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IHC實(shí)驗(yàn)步驟繁瑣，包括切片制作（固定，脫水，透明，包埋，切片，貼片，烤片），脫蠟，水化，阻斷，抗原修復(fù)，封閉，一抗孵育，二抗孵育，顯色，復(fù)染，封片和分析等，在上次的推文中向您介紹了切片制作和抗原修復(fù)兩個(gè)步驟中的常見(jiàn)問(wèn)題及解析，本次為您帶來(lái)的是封閉和一抗孵育中的注意事項(xiàng)。文末還附有IHC通關(guān)秘籍——Bioss全新上市的IHC即用型試劑盒，助您一次獲得文獻(xiàn)級(jí)的圖像結(jié)果。
封閉
1.圖片背景值過(guò)高。
解決方法：①在使用抗體前采用溶于甲醇或水的3% H2O2或使用專門的試劑盒進(jìn)行淬滅，并使用堿性磷酸酶抑制劑，以減少內(nèi)源性過(guò)氧化物酶或磷酸酶的干擾；
②使用生物素類的二抗系統(tǒng)來(lái)檢測(cè)如腎臟和肝臟等富含生物素的組織樣本時(shí)，可以在一抗孵育前用親和素/生物素封閉試劑進(jìn)行封閉，以減少內(nèi)源性生物素活性的干擾；
③在加入抗體前把多余的緩沖液吸干，而非對(duì)組織樣品進(jìn)行洗滌，以減少來(lái)自內(nèi)源性酶的干擾；
④蛋白封閉時(shí)間不足導(dǎo)致背景增強(qiáng)甚至出現(xiàn)假陽(yáng)性，應(yīng)選擇合適的封閉液，適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間；
一抗孵育
1.圖片背景值過(guò)高。
新品上市
熱銷產(chǎn)品
受篇幅限制，本次IHC實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題解析就先分享到這里。如果您還想更深入的學(xué)習(xí)IHC相關(guān)問(wèn)題，可以繼續(xù)關(guān)注本系列后續(xù)文章。如果您在使用我們的產(chǎn)品時(shí)出現(xiàn)任何問(wèn)題，請(qǐng)隨時(shí)聯(lián)系我們，Bioss資深I(lǐng)HC實(shí)驗(yàn)專家將為您全面講解，深度分析，幫助您輕松解決IHC的“疑難雜癥"！
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