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植物化學(xué)修飾的自然殺傷細(xì)胞重編程腫瘤微環(huán)境以實現(xiàn)實體瘤的強效免疫治療

更新時間:2025-06-27  |  點擊率:971

植物化學(xué)修飾的自然殺傷細(xì)胞重編程腫瘤微環(huán)境以實現(xiàn)實體瘤的強效免疫治療

植物化學(xué)修飾的自然殺傷細(xì)胞重編程腫瘤微環(huán)境以實現(xiàn)實體瘤的強效免疫治療


文獻(xiàn)標(biāo)題:Phytochemical natural killer cells reprogram tumor microenvironment for potent immunotherapy of solid tumors

發(fā)表期刊:Biomaterials

IF:15.304

一作單位:北京理工大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院



研究背景


      過繼性細(xì)胞移植(ACT)是通過體外激活擴(kuò)增供體淋巴細(xì)胞來誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng),自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)在ACT中具有毒性較低、反應(yīng)率更高及作用譜更廣等明顯優(yōu)勢。此外,由于NK細(xì)胞缺乏抗原特異性表面受體且不會引發(fā)移植物抗宿主病(GvHD),使用同種異體NK細(xì)胞可加速治療進(jìn)程。
      激活NK細(xì)胞以增強其細(xì)胞毒性是提升NK療法療效的關(guān)鍵?;蚬こ淌悄壳捌毡榈?/span>NK細(xì)胞激活手段,然而NK細(xì)胞的轉(zhuǎn)染和基因操作難度遠(yuǎn)高于T細(xì)胞,且基因工程產(chǎn)物仍存在諸多問題。作為替代方案,糖工程改造和脂質(zhì)體修飾等化學(xué)修飾方法也有報道,但這些方法通常存在效率低、穩(wěn)定性差的缺陷。
      即便實現(xiàn)了有效激活,要在實體瘤中充分發(fā)揮過繼性NK細(xì)胞的治療潛力仍十分困難,因為腫瘤微環(huán)境(TME)中的多種免疫抑制機制會嚴(yán)重?fù)p害NK細(xì)胞的效應(yīng)功能。特別是缺氧條件和活性氧簇(ROS)會顯著抑制其抗腫瘤活性,甚至誘發(fā)NK細(xì)胞凋亡;而白細(xì)胞介素-37(IL-37)、轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)等癌癥相關(guān)因子還會通過多種途徑對NK功能產(chǎn)生負(fù)面影響。目前針對免疫抑制性TME的逆轉(zhuǎn)方案僅限于使用抑制劑或靶向分子,但這些方案通常僅針對特定免疫逃逸相關(guān)因子,而TME對NK細(xì)胞的影響是普遍的,因此效果欠佳。迄今為止,能克服TME多重抑制作用的方案并不多,更遑論同時實現(xiàn)TME抑制解除與NK細(xì)胞激活的雙重目標(biāo)。
      本研究通過賦予NK細(xì)胞植物化學(xué)特性,實現(xiàn)了對實體瘤的有效免疫治療。通過膜融合技術(shù),用天然類囊體(Tk)膜修飾NK細(xì)胞,構(gòu)建出植物化學(xué)修飾的NK細(xì)胞(PC-NKs)。這種Tk工程化處理能顯著激活NK細(xì)胞,Tk膜上的抗氧化酶可抑制糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β),進(jìn)而提升NK細(xì)胞中激活受體和細(xì)胞毒性效應(yīng)分子的表達(dá)水平。系統(tǒng)性給藥后,PC-NKs細(xì)胞能精準(zhǔn)靶向腫瘤組織,并借助Tk膜上的*酶深度重編程TME,從而顯著增強直接殺傷能力并激活免疫性TME。該方案在實現(xiàn)顯著治療效果的同時幾乎不引發(fā)異常反應(yīng),直接殺傷作用與強免疫調(diào)節(jié)的協(xié)同效應(yīng)產(chǎn)生了強大的抗癌效果,為開發(fā)針對實體瘤的高效NK細(xì)胞療法提供了新思路。




實驗結(jié)果


1.采用Tk膜改造NK細(xì)胞
通過膜融合技術(shù),成功將Tk膜與NK細(xì)胞融合,形成PC-NKs細(xì)胞。該融合過程不影響NK細(xì)胞的活性和增殖能力,Tk組分被完整轉(zhuǎn)移至NK細(xì)胞,從而賦予NK細(xì)胞類囊體植物化學(xué)功能。

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2.抗氧化酶顯著提升PC-NKs細(xì)胞毒性
Tk膜上的抗氧化酶通過分解細(xì)胞內(nèi)ROS,誘導(dǎo)GSK-3β抑制,進(jìn)而上調(diào)NF-κB和p-eIF2B水平,最終實現(xiàn)PC-NKs細(xì)胞的顯著活化。Tk工程有效促進(jìn)了NK細(xì)胞激活受體的表達(dá),特別是核心受體NKG2D,同時降低了抑制性受體NKG2A的表達(dá)。NKG2D表達(dá)提升促進(jìn)了NK細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的特異性結(jié)合,進(jìn)而誘導(dǎo)靜息態(tài)NK細(xì)胞中溶解顆粒的極化,并刺激促炎細(xì)胞因子分泌。受體表達(dá)水平與細(xì)胞毒性效應(yīng)分子分泌的同步顯著增強,共同證實了Tk對NK細(xì)胞的有效激活作用。因此,PC-NKs細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞展現(xiàn)出比天然NK細(xì)胞更強的細(xì)胞毒性。

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3.PC-NKs細(xì)胞有效誘導(dǎo)免疫反應(yīng)
除了直接殺傷腫瘤細(xì)胞外,NK細(xì)胞在協(xié)調(diào)和啟動抗癌適應(yīng)性免疫反應(yīng)中也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。高活性的PC-NKs細(xì)胞能產(chǎn)生多種免疫調(diào)節(jié)相關(guān)分子,DNAM-1、FLT3L和CCL5這些關(guān)鍵配體不僅能將樹突狀細(xì)胞(DCs)募集至TME并促進(jìn)其成熟,增強成熟DC激活T細(xì)胞的能力。同時還能通過受體-配體相互作用誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞極化,將M2型巨噬細(xì)胞重編程為M1型表型,被PC-NKs細(xì)胞處理后的M2型巨噬細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞的吞噬率顯著上升。除了通過吞噬作用直接殺傷腫瘤細(xì)胞外,M1型巨噬細(xì)胞還能有效產(chǎn)生H?O?,這有利于PC-NKs細(xì)胞誘導(dǎo)的TME氧合作用,證實了PC-NKs細(xì)胞顯著的免疫調(diào)節(jié)能力。

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4.PC-NKs細(xì)胞顯著緩解TME缺氧


由于*酶作用,腫瘤細(xì)胞和TME中大量存在的H?O?會被PC-NKs細(xì)胞高效氧化,從而實現(xiàn)H?O?濃度下降與O?含量上升的同步效應(yīng)。H?O?分解與缺氧緩解對過繼性NK治療具有特殊意義。一方面,高濃度的H?O?易影響NKs的活性與功能。通過Tk膜上的*酶作用,對NK細(xì)胞進(jìn)行工程化改造,能在高H?O?水平環(huán)境中有效提升其活性,從而使PC-NKs細(xì)胞在實體瘤中的抗腫瘤性能顯著增強。另一方面,腫瘤組織中的缺氧環(huán)境會誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞表面NKG2D的特異性配體MIC分子脫落,從而促進(jìn)其對免疫監(jiān)視的抵抗。PC-NKs細(xì)胞上NKG2D表達(dá)量的增加以及腫瘤細(xì)胞上MICA分子的表達(dá),使得PC-NKs細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間能夠形成有效的受體-配體結(jié)合,這是NK細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞殺傷作用所必需的條件。此外,PC-NKs細(xì)胞表現(xiàn)出更強的腫瘤聚集性和明顯更慢的清除速率,證實了其更具活性的腫瘤靶向與識別能力。

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5.PC-NKs細(xì)胞顯著的體內(nèi)抗腫瘤效果
PC-NKs細(xì)胞治療組表現(xiàn)出更強的腫瘤細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)效應(yīng)和更低的腫瘤細(xì)胞增殖活性,腫瘤抑制率顯著升高,腫瘤生長顯著延緩,腫瘤組織中更多癌細(xì)胞出現(xiàn)結(jié)構(gòu)改變或死亡,腫瘤重量和體積顯著降低,小鼠生存期顯著延長,并且未觀察到肺轉(zhuǎn)移跡象,轉(zhuǎn)移指數(shù)與分級結(jié)果進(jìn)一步證實PC-NKs細(xì)胞治療顯著減輕了肺轉(zhuǎn)移負(fù)荷,驗證了PC-NKs療法相較于傳統(tǒng)過繼性NK療法的抗腫瘤性能。此外,PC-NKs細(xì)胞治療組小鼠的主要器官未出現(xiàn)明顯損傷,體重和血液生化指標(biāo)均無異常,驗證了該療法作為癌癥治療手段的安全性。
PC-NKs細(xì)胞的浸潤能力顯著增強,這可能源于其高度活化和改善的腫瘤富集特性。PC-NKs細(xì)胞浸潤的增加顯著促進(jìn)了DC細(xì)胞的成熟,增強成熟DC激活T細(xì)胞的能力。除免疫細(xì)胞外,免疫刺激細(xì)胞因子也是評估免疫反應(yīng)的重要指標(biāo),PC-NKs細(xì)胞治療組能誘導(dǎo)高水平的TNF-α和IFN-γ分泌,同時產(chǎn)生低量的TGF-β。這些數(shù)據(jù)共同證明,在荷瘤小鼠模型中,PC-NKs療法比單一NK療法具有更強的免疫刺激能力,從而產(chǎn)生更優(yōu)異的抗腫瘤治療效果。

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6.PC-NKs細(xì)胞誘導(dǎo)長期免疫記憶
PC-NKs細(xì)胞治療組中能夠進(jìn)行主要組織相容性復(fù)合體(MHC)I類分子介導(dǎo)的交叉呈遞(CD11c+MHCI+ DCs)的成熟DCs比例更高,促進(jìn)了具有優(yōu)異克隆多樣性和細(xì)胞毒活性的T細(xì)胞增殖。因此,PC-NKs細(xì)胞治療能夠促進(jìn)建立有效的免疫記憶效應(yīng),這對于良好的癌癥預(yù)后至關(guān)重要。

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討論


      通過膜融合方式用囊泡修飾NK細(xì)胞,在保持NK細(xì)胞活力和增殖能力的同時,通過抗氧化酶激活的ROS-GSK3β–NF–κB/eIF2B信號通路顯著增強了其活性。實驗結(jié)果表明,激活配體NKG2D與細(xì)胞毒性效應(yīng)分子的表達(dá)顯著提升,NK細(xì)胞的抗腫瘤細(xì)胞毒性明顯增強。經(jīng)系統(tǒng)性給藥后,高度活化的PC-NKs細(xì)胞高效富集于腫瘤組織,在分解H?O?的同時改善TME的缺氧狀態(tài)。這使腫瘤細(xì)胞表面配體MICA的表達(dá)水平大幅上升,進(jìn)而強化了NK細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的結(jié)合體形成,顯著提升了腫瘤殺傷能力。此外,PC-NKs細(xì)胞能有效重編程針對腫瘤的免疫應(yīng)答,使細(xì)胞毒性免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子得到明顯改善。直接殺傷作用與多重免疫調(diào)節(jié)功能的協(xié)同效應(yīng),在實體瘤治療中展現(xiàn)出令人振奮的抗癌效果。顯然,將Tk植物活性成分轉(zhuǎn)移至NK細(xì)胞,極大提升了其在實體瘤治療中的表現(xiàn)。該策略還具有快速、簡便、無需基因改造等特點,可推廣至其他基于細(xì)胞的療法。
     T細(xì)胞與TME中的ROS廣泛參與T細(xì)胞的失活、凋亡及功能抑制,因此,用Tk對T細(xì)胞進(jìn)行工程化改造,也將成為提升T細(xì)胞腫瘤免疫應(yīng)答和治療效能的潛力策略。同理,只要其他淋巴細(xì)胞活性受ROS和缺氧影響,理論上均可通過Tk膜融合技術(shù)提升其活性。下一代PC-NKs產(chǎn)品可通過工程化改造分泌游離因子或呈遞膜結(jié)合受體,從而增強體內(nèi)增殖與持久性、腫瘤歸巢及浸潤能力,并進(jìn)一步提升NK細(xì)胞的殺傷效力。

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